Pagrindinis DNR sintezės principas

Cheminė DNR sintezė pagrįsta kietosios fazės sintezės strategija ir fosforamidito chemija.Skirtingai nuo biologinės DNR sintezės, cheminės DNR sintezės medžiaga yra DMT (4,4-dimetoksitritilas) ir fosforamiditu modifikuotas dezoksiriboksisidas, kaip parodyta 1 paveiksle. DNR sintezė atliekama ant kieto pagrindo (galime pasiūlyti įvairiųOligo sintezės kolonėlė), ty CPG (kontroliuojamų porų stiklas) ir PS (polistirenas), o visa sintezė atliekamaDNR/RNR sintezatorius, kuri yra mūsų pagrindinė įranga, turi skirtingus modelius, tokius kaip: HY vieno kanalo sintezatorius, HY-12, HY-192 ir kt., sintezės kryptis yra nuo 3' iki 5', o nukleotidas į kietą atramą įvedamas per vieną sintezės ciklas.Įprastą sintezės ciklą sudaro keturi etapai: apsaugos pašalinimas, sujungimas, dangtelis ir oksidavimas (2 pav.).Apsaugos pašalinimas nustatytas taip, kad pašalintų DMT grupę ant kieto pagrindo arba 5' hidroksilo grupę iš ankstesnio nukleozido, 3% trichloracto rūgštis dichlormetane naudojama kaip apsaugos pašalinimo reagentas.Tada fosforamiditu modifikuotam dezoksiriboksisidui buvo leista paveikti hidroksilo grupę, naudojant aktyvatorių, ty 5-etiltiotetrazolą arba 4,5-dicianoimidazolą, sudarant fosfitetriesterį (III), ir buvo atliktas sujungimo etapas.Uždarymo etapas atliekamas siekiant blokuoti nesureagavusią hidroksilo grupę sujungimo etape, kad būtų sumažintas nepageidaujamų defektų sekų susidarymas.Galiausiai nestabilus fosfitetriesteris (III) oksiduojamas į chemiškai stabilų fosfortriesterį (V), naudojant jodą kaip oksidantą piridino sudėtyje.

Susintetinta DNR gali būti atskirta nuo kieto pagrindo aminolizės būdu, 2-cianoetilo apsaugota grupė ant fosfortriesterio ir amidas ant nukleobazės yra suskaidomi tuo pačiu metu, sintezės plokštės ir sintezės kolonėlės stovuose dedamos tiesiai į reakcijos kamerą. išApsaugos pašalinimo įranga.Neapdorota DNR gali būti paruošta naudojant HPLC, elektroforezę ir OPC pagal poreikį, taip pat galime suteikti jumsValymo įrangapo apdorojimo.